Peptydy Biotyny

Co to są biotynylowane peptydy?

Biotynylowane peptydy to peptydy, które zostały zmodyfikowane tak, aby zawierały ugrupowanie biotyny. Modyfikacja ta wykorzystuje interakcję o wysokim-powinowactwie między biotyną a awidyną lub streptawidyną, która jest szeroko stosowana w zastosowaniach biologicznych i biochemicznych. Cząsteczka biotyny jest mała, stabilna i nie zmienia znacząco struktury ani funkcji peptydu, a jednocześnie umożliwia wysoce wydajne wychwytywanie lub wykrywanie za pomocą systemów opartych na awidynie-.

 

Modyfikacja chemiczna
Biotynę zazwyczaj wprowadza się za pomocą odczynnika NHS-biotyny (N-hydroksysukcynimidu biotyny), który reaguje z pierwszorzędowymi grupami aminowymi znajdującymi się na N-końcu peptydu lub resztami lizyny, tworząc stabilne wiązanie amidowe.

生物素 (Biotyna) 肽 (Peptyd)

COOHNH2

| |

+---EDC/NHS--- → 活化羧基（Aktywacja） → 缩合（Sprzęganie）

↓ ↓

Biotyna-CONH-peptyd

 

Interakcja powinowactwa
Biotynylowany peptyd może silnie wiązać się (Kd ~10⁻¹⁵ M) z awidyną lub streptawidyną, dzięki czemu idealnie nadaje się do stosowania w testach wymagających precyzyjnego wykrywania, wychwytywania lub unieruchomienia.

Przypadki syntezy biotynylowanych peptydów

Sekwencja peptydów: biotyna-Ahx-YXXXXXXRXRRR-NH2

Długość: 11A

Purity: >95%

M.W: 1898.32

Sekwencja peptydów: biotyna-YXXXXXXRXRRR--ERXXXDLXXXXPVXXXXPRR

Długość: 31A

Purity: >95%

M.W: 4145.89

 

Zastosowania biotynylowanych peptydów

Biotynylowane peptydy są wszechstronnymi narzędziami w badaniach i przemyśle, o szerokim zakresie zastosowań, w tym:

Oczyszczanie powinowactwa

Stosowany do oczyszczania partnerów wiążących, takich jak białka, przeciwciała lub kwasy nukleinowe, poprzez unieruchomienie biotynylowanego peptydu na kulkach streptawidyny.

Test ELISA i Western Blot

Biotynylowane peptydy działają jak sondy do wykrywania specyficznych interakcji w połączeniu ze znacznikami awidyny-HRP lub awidyną-fluorescencyjnymi.

Powierzchniowy rezonans plazmonowy (SPR)

Stosowany do unieruchamiania peptydów na chipach biosensorów do badań interakcji.

Odkrycie leku

Przeszukiwanie kandydatów na leki poprzez analizę ich wiązania z biotynylowanymi celami peptydowymi.

Immunologia

Biotynylowane peptydy stosuje się do mapowania epitopów, badania interakcji antygenu-przeciwciał i przeprowadzania testów na komórkach T-.

Mapowanie epitopów na potrzeby opracowywania szczepionek

Do identyfikacji antygenowych epitopów białka wirusowego wykorzystano niestandardowy biotynylowany peptyd, co pomogło w zaprojektowaniu kandydata na szczepionkę.

Białka-Badania interakcji białek

Biotynylowane peptydy unieruchomione na płytkach pokrytych streptawidyną-umożliwiły badanie interakcji-receptora z ligandem, ujawniając powinowactwa wiązania krytyczne dla opracowywania leków.

Optymalizacja testów immunologicznych

W teście diagnostycznym jako antygeny zastosowano biotynylowane peptydy, aby poprawić czułość i swoistość testu ELISA w wykrywaniu biomarkerów choroby.

 

Referencje

1. Zielony, Nowy Meksyk (1975).Awidyna i streptawidyna.Dziennik biochemiczny, 131 (3), 781–791.

2. Chaiet, L. i Wolf, FJ (1964).Właściwości streptawidyny, białka-wiążącego biotynę produkowanego przez Streptomyces.Archives of Biochemistry and Biophysics, 106(1), 1-5.

3. Finn, FM i Titus, G. (1994).Biotynylacja białek w badaniach i biotechnologii.Anal Biochem, 218(1), 1-7.