-
Telefon
+86-0755 2308 4243
-
Adres
Pokój 309, budynek Meihua, tajwański park przemysłowy, nr 2132 Songbai Road, dystrykt Bao'an, Shenzhen, Chiny
-
Adres e-mail
Często zadawane pytania
Jakie metodologie syntezy stosuje Biorunstar do syntezy peptydów?
RE: Firma Biorunstar opracowała różne metodologie syntezy w fazie roztworu, aby spełnić wymagania klientów. Zwykle stosuje się chemię Fmoc w fazie stałej.
Jak wysyłacie peptydy? Jakie dane dotyczące kontroli jakości zostaną dostarczone?
RE: Wszystkie peptydy będą wysyłane za pośrednictwem DHL lub FedEx express w postaci liofilizowanego proszku w pojedynczych, dobrze oznakowanych fiolkach, w temperaturze pokojowej. Z wyjątkiem surowych peptydów, które będą sprawdzane wyłącznie za pomocą spektrometrii MALDI-MASS, do wszystkich syntetycznych oczyszczonych peptydów dołączony jest raport projektu (CoA), dane MS i dane HPLC. zostaną dostarczone arkusze danych zawierające kluczowe cechy, takie jak sekwencja peptydu, czystość, ilość, modyfikacja, dane dotyczące widma masowego i dane HPLC.
Jaki jest typowy czas syntezy peptydów? Jak długo trwa wysyłka do mnie?
RE: Nasz typowy czas realizacji wynosi 2-3 tygodni dla standardowego peptydu zawierającego mniej niż 30 aminokwasów. Czas realizacji różni się w zależności od długości peptydu, jego ilości, rozpuszczalności i trudności. Zwykle 3-5 dni na dotarcie do badaczy w innych krajach.
Jak długo można syntetyzować?
RE: Biorunstar ma duże doświadczenie w syntezie długich peptydów, do 130aa. W przeciwieństwie do wielu dostawców peptydów, którzy swobodnie wytwarzają peptydy o wielkości poniżej 30 lub 40 aminokwasów, Biorunstar ma duże doświadczenie w wytwarzaniu peptydów o wielkości od 40 do 90 aminokwasów. Trudno jest syntetyzować długie peptydy, zwłaszcza 100aa i dłuższe. Jeśli planujesz syntezę sekwencji o długości 130 aminokwasów lub dłuższej, skontaktuj się z nami w celu uzyskania niestandardowej usługi ekspresji i oczyszczania białek.
Co się stanie, jeśli w procesie syntezy lub oczyszczania pojawią się problemy?
RE: Każdy peptyd ma swoją specyficzną charakterystykę. Jeśli w trakcie syntezy wystąpią problemy wykraczające poza nasze oczekiwania i nie będziemy w stanie dostarczyć Twojego peptydu na czas, poinformujemy Cię o tym najszybciej, jak to możliwe. Jeśli przypadkiem nie uda nam się wyprodukować peptydu, nie poniosą Państwo żadnych kosztów.
Forma soli TFA, forma octanu lub soli HCl: którą formę wybrać?
Domyślnie peptydy syntetyzowane są w soli TFA. W przypadku eksperymentów związanych z hodowlą komórkową lub tkankową należy rozważyć produkcję peptydów w postaci octanu lub soli HCl w stężeniu 98% lub wyższym, aby uniknąć nieprawidłowych odpowiedzi. Za dodatkową opłatą można zamówić postać octanu lub soli HCl.
Jaki jest okres trwałości peptydu?
RE: Peptydy są stabilne przez co najmniej rok, jeśli są przechowywane w postaci liofilizowanej w zamrażarce. Jeśli peptydy zostaną rozpuszczone, okres przydatności do spożycia może zostać skrócony. Jeśli peptydy zawierają kilka reaktywnych aminokwasów, które można utlenić, jak Trp, Met, ale zwłaszcza Cys, okres przydatności do spożycia również może zostać skrócony.
Peptyd zawiera kilka cystein i dlatego może łatwo tworzyć wiązania dwusiarczkowe. Jak tego uniknąć?
RE: Jeśli sekwencja peptydu zawiera kilka cystein lub innych reaktywnych aminokwasów, które łatwo ulegają utlenieniu, Biorunstar oferuje dostarczenie peptydu ze śladami silnego reduktora DTT. Peptyd jest dostarczany z DTT tylko wtedy, gdy klient wyrazi na to zgodę.
Jak przechowywać syntetyczne peptydy?
RE: Większość liofilizowanych peptydów będzie stabilna w temperaturze pokojowej przez 2-3 tygodni. W przypadku długotrwałego przechowywania liofilizowane peptydy należy przechowywać w temperaturze -20. Należy unikać powtarzających się cykli zamrażania i rozmrażania. Przed otwarciem odczekać, aż osiągnie temperaturę pokojową. Okres trwałości roztworów peptydów jest ograniczony; przygotowany roztwór peptydu należy zużyć tak szybko, jak to możliwe.
Jaka jest czystość surowego i odsolonego peptydu? Jak oczyścić peptyd? Jakie są zanieczyszczenia?
RE: W przypadku krótkich peptydów o normalnych sekwencjach poniżej 15 aminokwasów jest to zazwyczaj 40-60% według HPLC dla gatunku surowego; 50-70% metodą HPLC dla gatunku odsolonego. Im dłuższy peptyd, tym niższa czystość w przypadku surowego lub odsolonego. Peptydy na ogół oczyszcza się metodą HPLC, stosując gradient wody i acetonitrylu. Większość zanieczyszczeń to fragmenty lub peptydy delecyjne, niecałkowicie odblokowane peptydy oraz pozostałości soli i wody.
Wyjaśnienie czystości peptydów metodą HPLC, całkowitej zawartości peptydów i docelowej zawartości peptydów.
RE: Biorunstar dostarcza peptydy według masy brutto liofilizowanego proszku. Liofilizowany proszek zawiera zanieczyszczenia, takie jak fragmenty lub peptydy delecyjne, niecałkowicie odblokowane peptydy, TFA i pozostałą wodę. Czystość peptydu mierzy się metodą HPLC. Jest to ilość prawidłowego peptydu w stosunku do wszystkich analitów, które absorbują przy ~214 nm (absorbuje wiązanie peptydowe), najprawdopodobniej sekwencje z delecją, skróceniem lub niecałkowicie pozbawionymi zabezpieczenia itp. Czystość peptydu metodą HPLC nie uwzględnia wody i soli które zwykle występują w próbce. Całkowita zawartość peptydów to procent wszystkich obecnych peptydów w stosunku do całej zawartości liofilizowanego proszku peptydowego. Całkowitą zawartość peptydu określa się za pomocą analizy zawartości azotu. Docelową zawartość peptydów w liofilizowanym proszku peptydowym można zatem wywnioskować ze wzoru: Całkowita zawartość peptydów X Czystość peptydu metodą HPLC.
Jaka jest metoda znakowania fluoresceiną?
RE: FITC (izotiocyjanian fluoresceiny) to aktywowany prekursor stosowany do etykietowania fluoresceiny. Do wydajnego znakowania N-końca, siedmiatomowy aminoheksanoil
odstępnik (NH2-CH2-CH2-CH2-CH2-CH2-COOH) wstawia się pomiędzy fluorofor (fluorosceinę) i N-koniec peptydu. Ten odstępnik pomaga oddzielić fluorofor od jego punktu przyłączenia, potencjalnie zmniejszając interakcję fluoroforu z biocząsteczką, z którą jest on sprzężony, i czyniąc go bardziej dostępnym dla wtórnych odczynników detekcyjnych.
odstępnik (NH2-CH2-CH2-CH2-CH2-CH2-COOH) wstawia się pomiędzy fluorofor (fluorosceinę) i N-koniec peptydu. Ten odstępnik pomaga oddzielić fluorofor od jego punktu przyłączenia, potencjalnie zmniejszając interakcję fluoroforu z biocząsteczką, z którą jest on sprzężony, i czyniąc go bardziej dostępnym dla wtórnych odczynników detekcyjnych.
Czy możliwe jest znakowanie C-końca biotyny (lub FITC)?
RE: Tak. Znakowanie C-końca biotyny (lub FITC) odbywa się poprzez dodanie reszty lizyny na C-końcu peptydu, a biotyna (lub FITC) jest przyłączona do bocznego łańcucha lizyny poprzez wiązanie amidowe. Dodatni ładunek lizyny zostaje usunięty.
Jaka jest odpowiednia długość peptydu do produkcji przeciwciał?
RE: Ogólnie zaleca się peptyd z resztą 10-25. Dłuższy peptyd mógłby mieć więcej epitopów, ale mógłby również mieć większą szansę na utworzenie stabilnych struktur drugorzędowych, które nie są formami natywnymi. Krótszy peptyd (<10aa) is generally not good unless there are valid reasons for it, such as potential sequence homology with a related family member or other proteins.
Co to jest MAPA?
RE: MAPS lub peptyd wieloantygenowy to rozgałęziony peptyd, w którym liniowe łańcuchy peptydowe są połączone na swoim C-końcu poprzez rdzeń polilizynowy, zwiększając w ten sposób rozmiar całej cząsteczki. Ma to na celu wyeliminowanie sprzęgania peptydów z KLH. Wydaje się jednak, że konformacja peptydów na MAP jest mniej elastyczna, a przeciwciała otrzymane metodą MAP zazwyczaj rozpoznają białko docelowe rzadziej niż w przypadku konwencjonalnej koniugacji KLH. Ponadto podczas wytwarzania MAPS nie wytwarza się wolny peptyd, co utrudnia usunięcie przeciwciał skierowanych przeciwko rdzeniowi polilizynowemu. Oczyszczanie MAPS metodą HPLC jest trudne, a MAPS jest dostarczany bez weryfikacji masy ze względu na jego niejednorodność i duży rozmiar cząsteczek.
Dlaczego mój roztwór peptydu skoniugowanego z KLH wydaje się mętny?
RE: KLH lub Hemocyjanina Keyhole Limpet to duże białko agregujące (MW=4x105 – 1x107). Ze względu na swój rozmiar i strukturę jego rozpuszczalność w wodzie jest ograniczona, co powoduje mętny wygląd. Nie ma to wpływu na immunogenność, a mętny roztwór można stosować do szczepień.
Czy możesz wyjaśnić piki masowe M+Na i M+K w widmach MALDI?
RE: Bardzo często w widmie MALDI można zobaczyć addukty Na (sodu) i K (potasu). Sód i potas pochodzą z wody stosowanej w rozpuszczalnikach peptydowych. Nawet woda destylowana i dejonizowana zawiera śladowe ilości jonów sodu i potasu, których nigdy nie da się całkowicie usunąć. Ulegają one jonizacji podczas procesu spektrometrii masowej MALDI i wiążą się z wolnymi grupami karboksylowymi peptydu. Ponieważ nie ma systemu oczyszczania wody, który usunie z wody każdy pojedynczy jon sodu lub potasu, czasami obserwowanie adduktów sodu i potasu jest bardzo powszechne i nieuniknione w widmie masowym MALDI. Nie oznacza to, że peptyd nie jest czysty, ani nie należy go mylić z nieprawidłową masą cząsteczkową.