Rozpuszczone peptydy katalogowe są kluczowym krokiem w wielu eksperymentach biochemicznych i biofizycznych. Jako dostawca wysokiej jakości peptydów katalogowych rozumiemy wyzwania i znaczenie właściwego rozpuszczania peptydów. Na tym blogu zbadamy kluczowe czynniki i metody skutecznego rozpuszczania peptydów katalogowych.
Zrozumienie cech peptydowych
Przed próbą rozpuszczenia peptydu konieczne jest zrozumienie jego właściwości fizycznych i chemicznych. Peptydy mogą się znacznie różnić pod względem składu aminokwasowego, długości, hydrofobowości i ładunku. Te cechy znacząco wpływają na rozpuszczalność peptydu.
Peptydy hydrofobowe, które zawierają wysoki odsetek aminokwasów nie polarnych, takich jak leucyna, izoleucyna i fenyloalanina, są często trudne do rozpuszczenia w roztworach wodnych. Z drugiej strony peptydy hydrofilowe z polarnymi lub naładowanymi aminokwasami, takimi jak lizyna, arginina i kwas glutaminowy, są bardziej rozpuszczalne w wodzie.
Na przykład,Osteokalcyna (7–19) (człowiek)jest stosunkowo krótkim peptydem. Jego rozpuszczalność zależy od określonych reszt aminokwasowych, które zawiera. Jeśli ma znaczną liczbę reszt hydrofobowych, może wymagać specjalnych rozpuszczalników do rozwiązania.
Wybór rozpuszczalnika
Wybór rozpuszczalnika jest jednym z najważniejszych czynników w rozpuszczaniu peptydu. Oto niektóre typowe rozpuszczalniki stosowane do rozpuszczania peptydu:
Wodne rozpuszczalniki
- Woda: Czysta woda jest najprostszym i najczęstszym rozpuszczalnikiem dla peptydów hydrofilowych. Jeśli peptyd ma dodatni ładunek netto lub ujemny na fizjologicznym pH, często może się łatwo rozpuścić w wodzie. Na przykład peptydy o wysokiej zawartości podstawowych aminokwasów (np. Lizyna i arginina) będą dodatnio naładowane przy neutralnym pH i mogą tworzyć interakcje jonowe z cząsteczkami wody, ułatwiając rozpuszczanie.
- Rozwiązania buforowane: Rozwiązania buforowane są często używane do utrzymania określonego środowiska pH. Różne peptydy mogą mieć optymalną rozpuszczalność przy różnych wartościach pH. Na przykład kwaśne peptydy mogą lepiej rozpuszczać się w nieco podstawowych buforach, podczas gdy podstawowe peptydy mogą być bardziej rozpuszczalne w buforach kwaśnych. Fosforan solanki buforowanej (PBS) jest szeroko stosowanym buforem w badaniach biologicznych. Zapewnia fizjologiczny pH i wytrzymałość jonową, która jest odpowiednia dla wielu peptydów, które będą stosowane w testach biologicznych.
Rozpuszczalniki organiczne
- Dimetylosulfotlenk (DMSO): DMSO jest wysoce polarnym rozpuszczalnikiem organicznym, który może rozpuścić szeroki zakres peptydów, w tym hydrofobowych. Ma zdolność rozkładania hydrofobowych interakcji między cząsteczkami peptydów. Jednak DMSO jest toksyczne dla komórek w wysokich stężeniach, więc jeśli peptyd jest przeznaczony do testów opartych na komórkach, stężenie DMSO w końcowym roztworze musi być starannie kontrolowane.
- Acetonitryl: Acetonitryl jest kolejnym powszechnym rozpuszczalnikiem organicznym stosowanym w rozpuszczaniu peptydów. Jest często stosowany w połączeniu z wodą w odwróconej - fazowej chromatografii cieczowej o wysokiej wydajności (RP - HPLC) do oczyszczania i analizy peptydu. Acetonitryl może zakłócać interakcje hydrofobowe w peptydach i jest przydatny do rozpuszczania umiarkowanie hydrofobowych peptydów.
DlaRanatensyna, które mogą mieć niektóre regiony hydrofobowe, mieszaninę wody i niewielką ilość DMSO lub acetonitrylu może być dobrym wyborem do rozpuszczania.
Techniki rozwiązania
Po wybraniu odpowiedniego rozpuszczalnika można zastosować następujące techniki do rozpuszczenia peptydu:
Delikatne mieszanie
Delikatnie wirowanie lub pipetowanie mieszaniny peptydu - rozpuszczalnika może pomóc w rozproszeniu cząstek peptydu i promowania rozpuszczania. Ta metoda jest odpowiednia dla peptydów, które są stosunkowo rozpuszczalne. Na przykład krótki, hydrofilowy peptyd może całkowicie rozpuścić się w ciągu kilku minut od delikatnego mieszania.
Sonizacja
Sonikowanie polega na zastosowaniu fal ultradźwiękowych do mieszaniny peptydu -rozpuszczalnika. Fale o wysokiej energii mogą rozkładać agregaty peptydowe i zwiększyć powierzchnię peptydu w kontakcie z rozpuszczalnikiem, przyspieszając w ten sposób rozpuszczanie. Jednak sonikacja może generować ciepło, które może powodować degradację lub utlenianie peptydu. Dlatego ważne jest, aby kontrolować czas i temperaturę sonikacji. Na przykład sonikacja powinna być przeprowadzana w krótkich seriach z odstępami, aby umożliwić ostygnięcie próbki.
Ogrzewanie
Ogrzewanie może zwiększyć energię kinetyczną cząsteczek peptydu i rozpuszczalnika, promując rozpuszczanie. Jednak tę metodę należy stosować ostrożnie, ponieważ wysokie temperatury mogą denaturować peptyd. W przypadku niektórych peptydów łagodne ogrzewanie (np. 37 ° C) przez krótki okres może być wystarczające do ich rozpuszczenia bez powodowania znacznego uszkodzenia.
Rozwiązywanie problemów
Czasami, nawet przy prawidłowych technikach rozpuszczalnika i rozpuszczania, peptydy mogą nadal nie rozpuszczać się całkowicie. Oto kilka możliwych powodów i rozwiązań:
Agregacja peptydu
Peptydy mogą tworzyć agregaty z powodu interakcji hydrofobowych, interakcji elektrostatycznych lub wiązania wodorowego. Jeśli podejrzewa się agregacja, dodanie niewielkiej ilości środka chaotropowego, takiego jak mocznik lub chlorowodorek guanidyny może pomóc w rozbiciu agregatów. Jednak środki te mogą również wpływać na aktywność biologiczną peptydu, dlatego należy je starannie stosować.
Nieprawidłowy wybór rozpuszczalnika
Jeśli peptyd nie rozpuszcza się w początkowo wybranym rozpuszczalniku, wypróbuj inny rozpuszczalnik lub mieszaninę rozpuszczalników. Na przykład, jeśli peptyd jest nierozpuszczalny w wodzie, spróbuj dodać do wody niewielką ilość DMSO lub acetonitrylu.
Zanieczyszczenie
Zanieczyszczenie peptydu lub rozpuszczalnika może również wpływać na rozwiązanie. Upewnij się, że cały sprzęt i rozpuszczalniki są czyste i wolne od zanieczyszczeń.
Studium przypadku:Biotynylowo -trzustkowy polipeptyd (ludzki)
WeźmyBiotynylowo -trzustkowy polipeptyd (ludzki)jako przykład. Ten peptyd ma dołączoną grupę biotyny, która może wpływać na jego rozpuszczalność. Jeśli jest to peptyd hydrofilowy, może dobrze rozpuszczać się w wodzie lub roztworze buforowanym. Jeśli jednak proces biotynylacji wprowadził pewne cechy hydrofobowe, może wymagać niewielkiej ilości rozpuszczalnika organicznego, takiego jak DMSO w celu całkowitego rozwiązania.
Po pierwsze, możemy spróbować rozpuścić go w wodzie przez delikatne mieszanie. Jeśli nie rozpuści się całkowicie, możemy dodać niewielką objętość DMSO (np. 1 - 5% v/v) i nadal mieszać. Sonikację można również zastosować do pomocy w procesie rozpuszczania, ale musimy monitorować temperaturę, aby zapobiec uszkodzeniu peptydu.
Wniosek
Rozpuszczone peptydy katalogowe są złożonym procesem, który wymaga starannego rozważenia właściwości peptydu, selekcji rozpuszczalnika i technik rozpuszczania. Rozumiejąc te czynniki i zgodnie z odpowiednimi procedurami, możemy upewnić się, że peptydy są skutecznie rozpuszczane i utrzymują aktywność biologiczną.
Jako wiodący dostawca peptydów katalogowych jesteśmy zaangażowani w zapewnianie produktów wysokiej jakości i profesjonalne wsparcie techniczne. Jeśli masz jakieś pytania dotyczące rozpuszczania peptydu lub potrzebujesz zakupu naszych peptydów katalogowych, skontaktuj się z nami w celu dalszej dyskusji. Z niecierpliwością czekamy na współpracę z Tobą, aby zaspokoić Twoje potrzeby badawcze.
Odniesienia
- Alberts, B., Johnson, A., Lewis, J., Raff, M., Roberts, K., i Walter, P. (2002). Biologia molekularna komórki. Garland Science.
- Hermanson, GT (2013). Techniki biokoniugatu. Academic Press.
- Snyder, LR, Kirkland, JJ, i Dolan, JW (2010). Wprowadzenie do współczesnej chromatografii cieczowej. Wiley.