Typowe problemy i rozwiązania w procesie syntezy peptydów obejmują następujące aspekty:
Zawartość peptydów: Zawartość peptydów odnosi się do procentu substancji peptydowych w próbce w stosunku do substancji niepeptydowych. W produktach peptydowych oprócz samego peptydu znajdują się również składniki niesolne wprowadzone w procesie produkcyjnym, takie jak woda, zaabsorbowane rozpuszczalniki, jony koordynacyjne i sole
Stabilność chemiczna:
Reakcja deamidacji: reszty Asn/Gln łatwo ulegają hydrolizie, tworząc Asp/Glu.
Hydroliza: Wiązania peptydowe w peptydach można łatwo rozerwać w wyniku hydrolizy, szczególnie te utworzone przez udział Asp, zwłaszcza wiązania peptydowe Asp Pro i Asp Gly.
Reakcja racemizacji: Wszystkie reszty aminokwasowe z wyjątkiem Gly mają chiralne atomy węgla alfa i są podatne na reakcję racemizacji w warunkach katalizy alkalicznej. Najbardziej podatne na reakcje racemizacji są pozostałości boleni.
- degradacja eliminacji: Cys, Ser, Thr, Phe, Tyr i inne pozostałości mogą ulec degradacji poprzez - eliminację, która jest bardziej prawdopodobna przy zasadowym pH i na którą wpływa temperatura i jony metali
Stabilność fizyczna:
Denaturacja, adsorpcja, agregacja lub wytrącanie: Denaturacja peptydów jest zwykle związana ze zniszczeniem struktur trzeciorzędowych i drugorzędowych. W stanie zdenaturowanym peptydy są bardziej podatne na reakcje chemiczne, a ich aktywność jest trudna do odzyskania. Półprodukt powstały w procesie denaturacji ma niską rozpuszczalność i jest podatny na agregację i wytrącanie
ochrona:
Najlepsze warunki przechowywania: Peptydy są zazwyczaj przechowywane w postaci liofilizowanego proszku, który jest bardzo stabilny w temperaturze -20, szczególnie po liofilizacji i przechowywany w suszarce o -20 stopniach. Większość peptydów można przechowywać w tej temperaturze przez kilka lat bez zmian. Aby zmniejszyć wpływ wilgoci, liofilizowane peptydy należy przywrócić do temperatury pokojowej w suchych warunkach przed wystawieniem na działanie powietrza.
Opakowanie: Hesheng Biotechnology zaleca małe opakowania, aby uniknąć powtarzających się cykli zamrażania i rozmrażania, zmniejszyć liczbę otwierań i zamknięć pojemników, zmniejszając w ten sposób ryzyko niewłaściwego obchodzenia się lub skażenia bakteryjnego oraz zapewniając stabilność peptydów
Testowanie czystości:
Gwarancja czystości: Wszystkie dostarczone peptydy osiągnęły wymaganą czystość, a peptydy niespełniające standardów zostaną odrzucone. Wyniki detekcji HPLC i MS mogą zweryfikować czystość i masę cząsteczkową peptydu, jednocześnie wyświetlając główne zanieczyszczenia.
Inne metody wykrywania, takie jak analiza aminokwasów lub analiza elementarna, mogą potwierdzić skład aminokwasów peptydów jako dodatkowy sposób potwierdzenia peptydu
Technologia syntezy:
Synteza peptydów w fazie stałej: Synteza peptydów w fazie stałej nie wymaga oczyszczania produktów pośrednich, co pozwala na ciągłe procesy syntezy i kładzie podwaliny pod automatyzację syntezy peptydów. W oparciu o syntezę chemiczną Fmoc zsyntetyzowano docelowy peptyd poprzez kowalencyjne połączenie grupy karboksylowej C-końcowego aminokwasu z nierozpuszczalną żywicą polimerową, a następnie wychodząc z grupy aminowej aminokwasu
Powyższa treść podsumowuje typowe problemy i środki zaradcze w syntezie peptydów, obejmując wiele aspektów, takich jak stabilność chemiczna, stabilność fizyczna, warunki przechowywania, badanie czystości itp.