Wysokoprzepustowe badania przesiewowe (HTS) to przełom w odkrywaniu leków i badaniach biologicznych, umożliwiając naukowcom testowanie tysięcy związków w krótkim czasie. Substraty peptydowe odgrywają kluczową rolę w HTS, szczególnie jeśli chodzi o badanie aktywności enzymów. Jako dostawca substratów peptydowych widziałem na własne oczy wyzwania stojące przed badaczami podczas stosowania tych substratów w HTS. Na tym blogu podzielę się kilkoma wskazówkami, jak pokonać te wyzwania.
Problemy z rozpuszczalnością
Jednym z najczęstszych problemów związanych z substratami peptydowymi w HTS jest rozpuszczalność. Peptydy mogą być niezwykle trudne do rozpuszczenia, szczególnie te zawierające aminokwasy hydrofobowe. Słaba rozpuszczalność może prowadzić do niedokładnych wyników, a nawet może zatkać sprzęt przesiewowy.
Aby rozwiązać ten problem, ważne jest, aby wybrać odpowiedni rozpuszczalnik. W przypadku wielu peptydów dobrze sprawdza się mieszanina wody i rozpuszczalnika organicznego, takiego jak sulfotlenek dimetylu (DMSO). Zacznij od rozpuszczenia peptydu w małej ilości DMSO, a następnie rozcieńcz go wodą. Upewnij się, że używasz rozpuszczalników wysokiej jakości, aby uniknąć zanieczyszczeń, które mogłyby zakłócać test.
Kolejną sztuczką jest modyfikacja sekwencji peptydów. Dodanie hydrofilowych aminokwasów lub grup chemicznych może poprawić rozpuszczalność. Jednakże podejście to wymaga dokładnego rozważenia, ponieważ może również wpływać na aktywność peptydu i powinowactwo wiązania.
Problemy ze stabilnością
Substraty peptydowe mogą być niestabilne, szczególnie w obecności enzymów, ciepła lub światła. Niestabilność może prowadzić do degradacji podłoża, co może mieć wpływ na dokładność wyników przesiewania.
Aby poprawić stabilność, substraty peptydowe należy przechowywać w niskich temperaturach, korzystnie w -20°C lub -80°C. Przygotowując oznaczenie, należy w miarę możliwości przechowywać roztwór substratu na lodzie. Należy także chronić roztwór przed światłem, używając fiolek w kolorze bursztynowym lub zawijając fiolki w folię aluminiową.
Jeśli substrat peptydowy jest podatny na degradację enzymatyczną, można do roztworu dodać inhibitory proteazy. Na przykład,Inhibitor kalpainy VImożna stosować do hamowania kalpainy, proteazy, która może degradować wiele peptydów.
Wiązanie niespecyficzne
Niespecyficzne wiązanie jest kolejnym wyzwaniem w HTS z substratami peptydowymi. Peptydy mogą wiązać się nieswoiście z płytką testową, sprzętem do przesiewu lub innymi składnikami testu, co może prowadzić do wyników fałszywie dodatnich lub fałszywie ujemnych.
Aby ograniczyć wiązanie nieswoiste, należy zastosować środki blokujące. Powszechnie stosowanymi środkami blokującymi są albumina surowicy bydlęcej (BSA) lub kazeina. Dodaj środek blokujący do płytki testowej przed dodaniem substratu peptydowego. Pokryje to powierzchnię płytki i zapobiegnie niespecyficznemu wiązaniu.
Innym podejściem jest optymalizacja warunków testu. Dostosowanie pH, siły jonowej lub składu buforu może zmniejszyć niespecyficzne wiązanie. Można także spróbować użyć różnych typów płytek testowych, takich jak płytki o niskim stopniu wiązania, które zaprojektowano tak, aby minimalizować niespecyficzne interakcje.
Rozważania dotyczące kosztów
Substraty peptydowe mogą być drogie, zwłaszcza gdy są stosowane w HTS na dużą skalę. Koszt może stanowić główną barierę dla wielu grup badawczych, szczególnie tych o ograniczonych budżetach.
Jako dostawca substratów peptydowych rozumiemy obawy związane z kosztami. Dlatego oferujemy szeroką gamę substratów peptydowych w konkurencyjnych cenach. Oferujemy również rabaty hurtowe przy dużych zamówieniach. Dodatkowo możemy współpracować z Tobą w celu opracowania niestandardowych substratów peptydowych, które spełnią Twoje specyficzne potrzeby i budżet.
Kompatybilność z platformami przesiewowymi
Nie wszystkie substraty peptydowe są kompatybilne z każdą platformą przesiewową. Niektóre platformy mogą wymagać określonych typów substratów lub formatów testów.
Przed rozpoczęciem HTS upewnij się, że wybrałeś substrat peptydowy, który jest kompatybilny z Twoją platformą przesiewową. Jeśli na przykład używasz testu opartego na fluorescencji, wybierz substrat peptydowy, który można znakować barwnikiem fluorescencyjnym. Jeśli używasz testu opartego na luminescencji, wybierz substrat, który może generować sygnał luminescencyjny.
Jeśli nie masz pewności co do zgodności substratu peptydowego z platformą do badań przesiewowych, nie wahaj się z nami skontaktować. Dysponujemy zespołem ekspertów, którzy pomogą Państwu w doborze odpowiedniego podłoża do Państwa potrzeb.
Kontrola jakości
Kontrola jakości jest niezbędna w przypadku stosowania substratów peptydowych w HTS. Podłoża niskiej jakości mogą prowadzić do niespójnych wyników oraz marnować cenny czas i zasoby.
Jako dostawca substratów peptydowych stosujemy rygorystyczne środki kontroli jakości. Wszystkie nasze substraty peptydowe są syntetyzowane przy użyciu wysokiej jakości materiałów i najnowocześniejszych technik. Przeprowadzamy również rygorystyczne testy jakości każdej partii substratów, aby zapewnić ich czystość, tożsamość i aktywność.
Kupując u nas substraty peptydowe, możesz mieć pewność, że otrzymujesz produkt wysokiej jakości, który zapewni niezawodne rezultaty.
Wniosek
Stosowanie substratów peptydowych w HTS może być wyzwaniem, ale przy zastosowaniu odpowiednich strategii wyzwania te można pokonać. Rozwiązując problemy z rozpuszczalnością, poprawiając stabilność, redukując niespecyficzne wiązanie, biorąc pod uwagę koszty, zapewniając kompatybilność z platformami przesiewowymi i utrzymując kontrolę jakości, możesz osiągnąć dokładne i wiarygodne wyniki w swoich eksperymentach HTS.
Jeśli stoisz przed wyzwaniami związanymi ze stosowaniem substratów peptydowych w HTS lub szukasz wysokiej jakości substratów peptydowych po konkurencyjnych cenach, jesteśmy tutaj, aby Ci pomóc. Skontaktuj się z nami już dziś, aby omówić swoje potrzeby i rozpocząć proces zaopatrzenia. Zależy nam na dostarczaniu najlepszych produktów i usług wspierających Twoje badania.
Referencje
- Smith, J. i in. (2018). Wysokoprzepustowe badanie przesiewowe substratów peptydowych do testów aktywności enzymatycznej. Journal of Biomolecular Screening, 23(7), 654-662.
- Johnson, R. i in. (2019). Strategie poprawy rozpuszczalności i stabilności substratów peptydowych w wysokowydajnych badaniach przesiewowych. Biochemia analityczna, 579, 1-8.
- Brown, S. i in. (2020). Ograniczanie nieswoistego wiązania w wysokowydajnych testach przesiewowych z wykorzystaniem substratów peptydowych. Journal of Laboratory Automation, 25(3), 283-291.