Hej, inni entuzjaści komórek! Jako dostawca komórek TET - 213, miałem swój spory udział w doświadczeniach dotyczących tych unikalnych komórek. Na tym blogu podzielę się kilkoma wskazówkami, jak utrzymać żywotność komórek TET - 213.
Po pierwsze, zrozummy, jakie są komórki TET - 213. Są rodzajem linii komórkowej, która wykazała duży potencjał w różnych obszarach badawczych, takich jak neuronauka i badania raka. Ale utrzymywanie ich przy życiu i kopnięciu nie zawsze jest spacerem po parku.
Pożywka hodowli komórkowej
Podstawą utrzymania dowolnej linii komórkowej jest właściwa pożywka hodowlankowa. W przypadku komórek TET - 213 podłoże wysokiej jakości jest koniecznością. Zwykle zalecam użycie medium bogatego w niezbędne składniki odżywcze. Pożywka RPMI 1640, uzupełniona 10% płodowej surowicy bydlęcej (FBS), penicyliną i streptomycyną, pracowała dla mnie cuda. FBS zapewnia czynniki wzrostu i hormony, które komórki te muszą się rozwijać, podczas gdy antybiotyki pomagają zapobiec zanieczyszczeniu.
Pamiętaj, aby właściwie przechowywać medium. Trzymaj go w 4 ° C i chroń przed światłem. Przed użyciem ogrzaj go do 37 ° C w kąpieli wodnej. To naśladuje temperaturę ciała i jest wygodniej dla komórek.
Warunki inkubacji
TET - 213 Komórki są dość wybredne w swoim środowisku. Lubią inkubować w 37 ° C w wilgotnej atmosferze z 5% CO₂. Środowisko to bardzo przypomina warunki fizjologiczne w ludzkim ciele.
Zainwestuj w dobry inkubator. Powinien mieć stabilną temperaturę i kontrolę CO₂. Regularnie sprawdzaj ustawienia i kalibrację inkubatora, aby upewnić się, że wszystko jest w porządku. Ponadto regularnie wyczyść inkubator, aby zapobiec budowie zanieczyszczeń.
Subkulowanie
Subkulowanie jest ważnym krokiem w utrzymaniu żywotności komórek. Kiedy komórki TET - 213 osiągają około 80 - 90% konfluencji, czas je podzielić. Najpierw usuń starą pożywkę i umyj komórki solą fizjologiczną z buforowaną fosforanem (PBS), aby pozbyć się resztek. Następnie dodaj roztwór trypsyny - EDTA, aby odłączyć komórki od kolby hodowlanej. Inkubuj kolbę w 37 ° C przez kilka minut, aż komórki zaczną się dogadać i odłączyć.
Po oderwaniu komórek dodaj świeżą pożywkę, aby zneutralizować trypsynę. Odwirowanie zawiesiny komórek z niską prędkością w celu osadu komórek. Ponownie ponownie pellet w świeżym pożywce i przenieś komórki na nowe kolby hodowlane przy odpowiedniej gęstości siewu. Gęstość siewu około 5 x 10⁴ komórek/cm² zwykle działa dobrze dla komórek TET - 213.
Monitorowanie zdrowia komórek
Kluczowe jest regularne monitorowanie zdrowia komórek TET - 213. Użyj mikroskopu kontrastowego, aby sprawdzić morfologię komórki. Zdrowe komórki TET - 213 powinny mieć jednolity kształt i być dobrze - przymocowany do kolby. Jeśli zauważysz jakiekolwiek oznaki śmierci komórek, takie jak pływające komórki lub nieprawidłowe kształty komórek, może to być oznaka problemu.
Możesz także wykonać test rentowności, taki jak test wykluczenia Trypan Blue. Wymieszaj niewielką ilość zawieszenia komórkowego z niebieskim trypanem. Żywe komórki wykluczą barwnik, podczas gdy martwe komórki będą go wzbudzić i wyglądają na niebieski. Policz liczbę żywych i martwych komórek za pomocą hemocytometru w celu obliczenia procentu żywotności komórek.
Jakość odczynników
Korzystanie z odczynników wysokiej jakości nie można negocjować. Jakość FBS, antybiotyków i innych dodatków może mieć znaczący wpływ na żywotność komórek. Wybierając FBS, poszukaj partii, która została przetestowana pod kątem jej zdolności do wspierania wzrostu komórek. Unikaj stosowania odczynników lub odczynników, które zostały przechowywane niewłaściwie.
Niektóre inne czynniki, które należy wziąć pod uwagę, to peptydy, które można zastosować w połączeniu z komórkami TET - 213. Na przykład,Białko melanocytów PMEL 17 (130–138) (człowiek)wykazał potencjał w niektórych badaniach związanych z sygnalizacją komórkową.Urechistachininin iIDynorfin A (1–17)są również peptydami, które można zbadać w kontekście badań komórek TET - 213.
Rozwiązywanie problemów
Jeśli masz problemy z utrzymaniem żywotności komórek TET - 213, nie panikuj. Oto kilka typowych problemów i rozwiązań:
Zanieczyszczenie: Jeśli zobaczysz oznaki zanieczyszczenia bakteryjnego lub grzybowego, takie jak zachmurzenie w średnich lub widocznych koloniach, natychmiast odrzuć zanieczyszczone kultury. Dokładnie wyczyść inkubator i cały sprzęt. Podczas obsługi komórek postępuj zgodnie z ścisłymi technikami aseptycznymi.
Słaby wzrost komórek: Jeśli komórki nie rosną dobrze, sprawdź pożywkę hodowlaną. Możliwe, że medium jest stare lub suplementy nie działają poprawnie. Upewnij się również, że warunki inkubacji są prawidłowe. Czasami niewielka zmiana temperatury lub stężenia CO₂ może wpływać na wzrost komórek.
Oddział komórki: Jeśli komórki zbyt łatwo się oddzielają, może to być spowodowane przekroczeniem - trypsynizacji. Następnym razem skróć czas inkubacji trypsyny. Upewnij się również, że rozwiązanie trypsyny - EDTA jest świeże.
Podsumowując, utrzymanie żywotności komórek TET - 213 wymaga dbałości o szczegóły i dobrego zrozumienia ich potrzeb. Postępując zgodnie z tymi wskazówkami, możesz zachować zdrowe i produktywne komórki TET - 213.
Jeśli jesteś na rynku wysokiej jakości komórek TET - 213, chciałbym porozmawiać z tobą. Niezależnie od tego, czy jesteś badaczem pracującym nad małym projektem, czy duża firma biotechnologiczna, mogę dostarczyć potrzebne komórki. Skontaktuj się z rozmową o twoich wymaganiach i o tym, jak możemy współpracować.
Odniesienia
- Freshney, RI (2016). Kultura komórek zwierzęcych: Podręcznik podstawowej techniki i specjalistyczne zastosowania. Wiley.
- Doyle, A., i Griffiths, JB (2012). Hodowla komórek i tkanek: procedury laboratoryjne. Wiley - Blackwell.