W jaki sposób określa się ilościowo peptydy katalogowe?
Hej tam! Jestem dostawcą peptydów katalogowych i dzisiaj chcę porozmawiać o tym, jak podchodzimy do ilościowego oznaczania tych małych facetów. Peptydy są niezwykle ważne w wielu dziedzinach, od badań po medycynę, a dokładne oznaczenie ilościowe ma kluczowe znaczenie.
Na początek porozmawiajmy o tym, dlaczego w ogóle musimy oznaczać ilościowo katalogowe peptydy. Cóż, kiedy badacze lub ludzie w dziedzinie medycyny używają peptydów, muszą dokładnie wiedzieć, z jaką ilością pracują. Niezależnie od tego, czy chodzi o eksperyment laboratoryjny, badanie kliniczne, czy opracowywanie nowego leku, znaczenie mają dokładne ilości. Jeśli użyjesz za mało, wyniki mogą nie być dokładne, a jeśli użyjesz za dużo, możesz zepsuć całość.
Jak to zrobić? Istnieje kilka różnych metod, a ja je dla Ciebie omówię.
Jednym z najpowszechniejszych sposobów jest spektroskopia UV – Vis. Metoda ta wykorzystuje fakt, że peptydy absorbują światło ultrafioletowe i widzialne o określonych długościach fal. Aminokwasy, takie jak tryptofan, tyrozyna i fenyloalanina, mają pewne właściwości wchłaniania. Kiedy oświetlamy roztwór naszego peptydu światłem o określonej długości fali, możemy zmierzyć, ile tego światła zostało zaabsorbowane. Na podstawie wartości absorpcji i znanego współczynnika ekstynkcji peptydu (który jest powiązany ze składem aminokwasowym) możemy obliczyć stężenie peptydu w roztworze. Na przykład, jeśli mamy peptyd o dużej zawartości tryptofanu, pochłonie on więcej światła przy długości fali około 280 nm. Aby obliczyć stężenie, używamy prostego wzoru opartego na prawie Beera-Lamberta. Jest to stosunkowo szybka i łatwa metoda, ma jednak pewne ograniczenia. Zanieczyszczenia w roztworze peptydu mogą również absorbować światło o tej samej długości fali, co może zakłócać nasze pomiary.
Inną popularną metodą jest test Bradforda. Jest to test kolorymetryczny wykorzystujący barwnik o nazwie Coomassie Brilliant Blue G - 250. Kiedy barwnik ten zwiąże się z peptydem, zmienia kolor. Następnie możemy zmierzyć absorbancję kolorowego roztworu przy określonej długości fali (zwykle około 595 nm). Stopień zmiany koloru jest proporcjonalny do ilości peptydu w roztworze. Tworzymy krzywą standardową przy użyciu znanych stężeń peptydu referencyjnego, a następnie porównujemy absorbancję naszej nieznanej próbki peptydu z tą krzywą, aby określić jej stężenie. Test Bradforda jest dość czuły, ale mogą na niego wpływać pewne substancje zawarte w próbce, takie jak detergenty lub sole.
HPLC, czyli wysokosprawna chromatografia cieczowa, jest również szeroko stosowana do oznaczania ilościowego peptydów. W HPLC oddzielamy peptyd od innych składników próbki na podstawie jego właściwości chemicznych, takich jak hydrofobowość. Wstrzykujemy roztwór peptydu do kolumny wypełnionej fazą stacjonarną, a następnie za pomocą fazy ruchomej (ciekłego rozpuszczalnika) przepychamy peptyd przez kolumnę. Różne peptydy będą przemieszczać się przez kolumnę z różną szybkością i możemy je wykryć, gdy wychodzą z kolumny, za pomocą detektora, zwykle detektora UV. Porównując obszar piku naszego interesującego peptydu z obszarami pików znanych standardów, możemy obliczyć jego stężenie. HPLC jest świetna, ponieważ umożliwia rozdzielanie i oznaczanie ilościowe peptydów nawet w złożonych mieszaninach, ale jest nieco bardziej czasochłonna i wymaga specjalistycznego sprzętu.
Porozmawiajmy teraz trochę o niektórych oferowanych przez nas peptydach katalogowych. BraćEntero-HylambatynaNa przykład. Kiedy określamy ilościowo ten peptyd, stosujemy kombinację tych metod, aby uzyskać najdokładniejszy wynik. Najpierw używamy spektroskopii UV - Vis, aby uzyskać przybliżone oszacowanie stężenia, a następnie dwukrotnie - sprawdzamy je za pomocą HPLC. W ten sposób możemy uwzględnić wszelkie potencjalne zanieczyszczenia lub zakłócenia w próbce.
Jest jeszcze jedenE[c(RGDyK)]2. Peptyd ten ma pewne unikalne właściwości i musimy zachować szczególną ostrożność przy jego oznaczaniu ilościowym. Test Bradforda może nie być tutaj najlepszym wyborem ze względu na specyficzny skład aminokwasów, dlatego bardziej polegamy na HPLC i spektroskopii UV-Vis.
A potem jestMazdutyd (Lys20(N₃-CH₂CO-)). Jest to bardziej złożony peptyd i stosujemy podejście wieloetapowe. Zaczynamy od UV-Vis, aby uzyskać wstępny odczyt, następnie używamy HPLC, aby oddzielić go od wszelkich zanieczyszczeń i uzyskać dokładniejsze oznaczenie ilościowe.
W naszej firmie kontrola jakości to wielka sprawa. Przy oznaczaniu ilościowym naszych peptydów katalogowych dbamy o przestrzeganie ścisłych protokołów. Przeprowadzamy wiele testów dla każdej partii i porównujemy nasze wyniki z certyfikowanymi materiałami referencyjnymi, aby zapewnić dokładność. Prowadzimy również szczegółową dokumentację wszystkich danych ilościowych, dzięki czemu nasi klienci mogą mieć pełne zaufanie do kupowanych przez siebie peptydów.
Jeśli szukasz wysokiej jakości peptydów katalogowych i potrzebujesz dokładnej oceny ilościowej, jesteśmy tutaj, aby Ci pomóc. Niezależnie od tego, czy jesteś badaczem poszukującym peptydów do swojego kolejnego dużego eksperymentu, czy firmą farmaceutyczną opracowującą nowy lek, mamy peptydy, których potrzebujesz. Nasz zespół ekspertów jest zawsze dostępny, aby odpowiedzieć na wszelkie pytania dotyczące naszych produktów lub procesu oznaczania ilościowego. Nie wahaj się więc skontaktować i rozpocząć rozmowę na temat swoich potrzeb w zakresie peptydów. Jesteśmy gotowi współpracować z Tobą, aby znaleźć najlepsze rozwiązania dla Twoich projektów.
Referencje
- Lunety, RK (1994). Oczyszczanie białek: zasady i praktyka. Skoczek.
- Skoog, DA, West, DM, Holler, FJ i Crouch, SR (2013). Podstawy chemii analitycznej. Nauka Cengage’a.
- Bollag, DM, Różycki, MD i Edelstein, SJ (1996). Metody białkowe. Wiley-Liss.