W dziedzinie badań biologicznych linia komórkowa TET - 213 pojawiła się jako znaczący model dla różnych badań eksperymentalnych, szczególnie w badaniach związanych z neuronauki i onkologią. Jako wiodący dostawca komórek TET - 213, rozumiemy znaczenie wyboru odpowiednich odczynników transfekcji dla wydajnego dostarczania genów do tych komórek. Ten post na blogu ma na celu zbadanie odczynników transfekcji, które są odpowiednie dla TET - 213 i zapewnić wgląd w ich zalety i ograniczenia.
Zrozumienie komórek TET - 213
TET - 213 to ludzka neuronalna linia komórkowa, która jest powszechnie stosowana w badaniach ze względu na jego zdolność do różnicowania się w komórki podobnie jak neuron. Komórki te pochodzą z guza neuroblastoma i zachowują wiele właściwości neuronalnych komórek progenitorowych. Ich unikalne właściwości sprawiają, że są cenne do badania rozwoju neuronów, funkcji i patogenezy chorób neurologicznych. Transfekowanie genów egzogennych do komórek TET - 213 może pomóc badaczom zrozumieć funkcję genów, mechanizmy regulacyjne i wpływ specyficznych białek na procesy komórkowe.
Kluczowe rozważania dotyczące transfekcji w komórkach TET - 213
Przed wybraniem odczynnika transfekcji należy wziąć pod uwagę kilka czynników. Po pierwsze, wydajność transfekcji jest kluczowa. Transfekcja wysokiej wydajności zapewnia, że duży odsetek komórek przyjmuje egzogenny DNA lub RNA, umożliwiając solidną ekspresję genu docelowego. Po drugie, żywotność komórek musi być utrzymywana po transfekcji. Niektóre odczynniki transfekcji mogą być toksyczne dla komórek, co prowadzi do śmierci komórek lub nieprawidłowego zachowania komórkowego. Po trzecie, rodzaj transfekcji kwasu nukleinowego (DNA, RNA lub oligonukleotydy) i jego wielkość może również wpływać na wybór odczynnika transfekcji.
Odczynniki transfekcji odpowiednie dla komórek TET - 213
Odczynniki transfekcji na bazie lipidów
Odczynniki transfekcji oparte na lipidach są jednym z najczęściej stosowanych rodzajów środków transfekcyjnych. Pracują, tworząc liposomy, które kapsułkują kwas nukleinowy i łączą błonę komórkową, umożliwiając kwas nukleinowy wejść do komórki. Lipofektamina 2000 to dobrze znany odczynnik transfekcyjny na bazie lipidów, który był szeroko stosowany do transfekcji komórek TET - 213. Oferuje wysoką wydajność transfekcji, stosunkowo niską toksyczność i nadaje się do transfekcji zarówno DNA, jak i RNA.
Mechanizm lipofektaminy 2000 obejmuje tworzenie pozytywnie naładowanych liposomów, które oddziałują z ujemnie naładowanym kwasem nukleinowym w celu utworzenia lipopleksów. Te lipopleksy są następnie internalizowane przez komórki poprzez endocytozę. Po wejściu do komórki kwas nukleinowy jest uwalniany i może być transportowany do jądra w celu ekspresji genów.
Kolejny odczynnik oparty na lipidach, lipofektamina 3000, wykazał również dobrą wydajność w transfekcji komórek TET - 213. Jest to ulepszona wersja lipofektaminy 2000, o zwiększonej wydajności transfekcji i zmniejszonej toksyczności. Lipofektamina 3000 wykorzystuje nowatorski preparat, który pozwala na lepszą interakcję z błoną komórkową i bardziej wydajne dostarczanie kwasów nukleinowych.
Odczynniki transfekcji na bazie polimerów
Odczynniki transfekcji na bazie polimerów są kolejną opcją do transfekcji komórek TET - 213. Polietylenimina (PEI) jest powszechnie stosowanym odczynnikiem opartym na polimerze. PEI jest kationowym polimerem, który może kondensować kwasy nukleinowe w małe cząstki i promować ich pobieranie przez komórki. Doniesiono, że osiąga wysoką wydajność transfekcji w komórkach TET - 213, szczególnie w przypadku transfekcji DNA. Zaletą PEI jest jego niski koszt i łatwość użytkowania. Może to jednak być toksyczne dla komórek w wysokich stężeniach, dlatego wymagana jest staranna optymalizacja warunków transfekcji.
Jetpei to komercyjny odczynnik transfekcji oparty na polimerze, który został zaprojektowany w celu zminimalizowania toksyczności przy jednoczesnym zachowaniu wysokiej wydajności transfekcji. Z powodzeniem wykorzystano go w transfekcji komórek TET - 213, zapewniając dobrą równowagę między wydajnością transfekcji a żywotnością komórek.
Wirusowe wektory transfekcji
Wektory oparte na wirusach są również szeroko stosowane do dostarczania genów do komórek TET - 213. Wektory adenowirusa są znane z wysokiej wydajności transfekcji i zdolności do infekowania zarówno komórek podziału, jak i nie podziału. Mogą nosić stosunkowo duże ilości egzogennego DNA i zapewnić silną i trwałą ekspresję genów. Jednak produkcja wektorów adenowirusa jest bardziej złożona i czasochłonna w porównaniu z nieczystymi odczynnikami transfekcji.
Wektory lentiwirusowe to kolejna opcja. Mogą zintegrować egzogenny DNA z genomem komórek gospodarza, co powoduje stabilną ekspresję genów. Wektory lentiwirusowe są odpowiednie do długoterminowych badań w komórkach TET - 213, takich jak generowanie stabilnych linii komórkowych. Wymagają jednak również specjalnego obsługi ze względu na ich potencjalne ryzyko biologiczne.
Porównanie odczynników transfekcji dla komórek TET - 213
Porównując różne odczynniki transfekcji, ważne jest, aby wziąć pod uwagę ich wydajność pod względem wydajności transfekcji, żywotności komórek, łatwości użytkowania i kosztów. Odczynniki oparte na lipidach, takie jak lipofektamina 2000 i 3000, są stosunkowo łatwe w użyciu i mają wysoką wydajność transfekcji o akceptowalnej żywotności komórek. Są odpowiednie zarówno do eksperymentów krótkoterminowych, jak i długoterminowych. Odczynniki oparte na polimerach, takie jak PEI i Jetpei, są skuteczne i mogą osiągnąć dobrą wydajność transfekcji, ale potrzebna jest optymalizacja toksyczności. Wektory oparte na wirusach oferują wysoką wydajność dostarczania genów i stabilną ekspresję, ale wymagają bardziej wyspecjalizowanego sprzętu i środków bezpieczeństwa.
Zastosowania transfekowanych komórek TET - 213
Po pomyślnym transfekcji komórki TET - 213 można stosować w różnych zastosowaniach. Na przykład w badaniach funkcji genów transfekowane komórki można wykorzystać do zbadania roli określonych genów w rozwoju i funkcji neuronów. Dzięki nadekspresji lub zniszczeniu konkretnego genu naukowcy mogą obserwować zmiany w morfologii komórkowej, uwalnianiu neuroprzekaźników i szlakach przekazywania sygnału.
W odkrywaniu leków transfekowane komórki TET - 213 mogą być stosowane jako model badań przesiewowych w celu zidentyfikowania potencjalnych środków terapeutycznych. Na przykład geny związane z chorobami neurologicznymi można transfekować do komórek, a następnie komórki można leczyć różnymi związkami, aby ocenić ich wpływ na fenotypy związane z chorobą.
Ponadto komórki TET - 213 transfekowane genami kodującymi białka fluorescencyjne mogą być stosowane w badaniach obrazowania żywych. To pozwala badaczom obserwować dynamiczne procesy komórkowe w prawdziwym czasie.
Powiązane peptydy do powiązanych eksperymentów
W niektórych eksperymentach obejmujących transfekowane komórki TET - 213 można zastosować dodatkowe peptydy. Na przykład,Cyclo (Radfk)WSubstancja P (9–11), IBeta - amyloid (1–40), człowiekMoże być stosowany w badaniach związanych z sygnalizacją neuronalną, interakcjami receptora peptydu i chorób neurodegeneracyjnych. Te peptydy mogą pomóc w dalszym wyjaśnianiu mechanizmów leżących u podstaw funkcji neuronalnej i rozwoju choroby.
Wniosek
Wybór odpowiedniego odczynnika transfekcji dla komórek TET - 213 ma kluczowe znaczenie dla udanego dostarczania genów i późniejszych badań eksperymentalnych. Odczynniki transfekcji oparte na lipidach, oparte na polimerach i wirusowe mają swoje własne zalety i ograniczenia. Naukowcy powinni dokładnie rozważyć szczególne wymagania swoich eksperymentów, takie jak wydajność transfekcji, żywotność komórek i rodzaj transfekcji kwasu nukleinowego, przy wyborze odczynnika transfekcji.
Jako dostawca komórek TET - 213, jesteśmy zaangażowani w dostarczanie komórek wysokiej jakości i oferowanie wskazówek na temat najlepszych praktyk hodowli i transfekcji komórkowej. Jeśli jesteś zainteresowany zakupem komórek TET - 213 do badań lub masz pytania dotyczące odczynników transfekcji i powiązanych eksperymentów, skontaktuj się z nami w celu uzyskania dodatkowych informacji i omówienie potencjalnych możliwości współpracy.
Odniesienia
- Sambrook, J., i Russell, DW (2001). Klonowanie molekularne: podręcznik laboratoryjny. Cold Spring Harbor Laboratory Press.
- Chen, C. i Okayama, H. (1987). Wysoka transformacja komórek ssaków przez plazmid DNA. Biologia molekularna i komórkowa, 7 (8), 2745 - 2752.
- Amara, F., Rehem, A., i Galy, A. (2016). Przegląd aktualnych metod transfekcji i systemów dostarczania. Journal of Pharmacy & Bioallied Sciences, 8 (3), 181–187.