Badanie przesiewowe peptydów na komórkach TET - 213 jest kluczowym procesem w dziedzinie badań biomedycznych, szczególnie jeśli chodzi o zrozumienie interakcji między peptydami i specyficznymi liniami komórkowymi. Jako dostawca komórek TET - 213, mam się dobrze - w technikach i procedurach wymaganych do udanego badania przesiewowego peptydu na tych komórkach. Na tym blogu poprowadzę Cię przez krok - według procesu wykonywania badań przesiewowych peptydów na komórkach TET - 213.
Zrozumienie komórek TET - 213
Komórki TET - 213 są rodzajem ludzkiej linii komórkowej neuroblastoma. Są one szeroko stosowane w badaniach ze względu na ich pochodzenie neuronowe, co czyni je cennym modelem do badania funkcji neuronalnej, rozwoju i chorób. Komórki te mogą być utrzymywane w hodowli w określonych warunkach, umożliwiając różne eksperymentalne manipulacje, w tym badanie przesiewowe peptydu.
Przygotowanie do badań przesiewowych peptydów
1. Kultura komórkowa
Przed rozpoczęciem badań przesiewowych peptydów konieczne jest posiadanie zdrowej i aktywnie rosnącej hodowli komórek TET - 213. Komórki są zwykle hodowane w odpowiedniej pożywce wzrostowej, takiej jak RPMI 1640 uzupełniona 10% płodowej surowicy bydlęcej (FBS), 1% penicylina - streptomycyna i inne niezbędne składniki odżywcze. Komórki powinny być utrzymywane w 37 ° C w nawilżonej atmosferze zawierającej 5% CO₂.
Regularne hodowanie jest wymagane do utrzymania komórek w wykładniczej fazie wzrostu. Gdy komórki osiągną około 70 - 80% konfluencji, można je pasować za pomocą roztworu Trypsyny - EDTA. To leczenie enzymatyczne odłącza komórki od kolby hodowlanej, a następnie można je przenieść na nowe kolby lub płytki do dalszych eksperymentów.
2. Wybór peptydu
Wybór peptydów do badań przesiewowych jest krytycznym krokiem. Peptydy można wybrać na podstawie ich potencjalnych aktywności biologicznych, takich jak ich zdolność do interakcji ze specyficznymi receptorami na komórkach TET - 213, modulowanie szlaków sygnalizacyjnych komórkowych lub mają działanie neuroprotekcyjne. Niektóre powszechne peptydy stosowane w badaniach przesiewowych na neuronalnych liniach komórkowych obejmują [beta - amyloid (1 - 42), mysz, szczur] ( /katalog - peptydy /beta - amyloid - 1 - 42 - mysie - szczur.html), [endotelina - 1 ludzka] ( /katalog - peptydy /endotelina - 1 - ludzka), a [beta - 1 - 42), human] ( /katalog - peptydy /endotelina - 1 - ludzka. Ludzki] ( /katalog - peptydy /beta - amyloid - 1 - 42 - Human.html).
Te peptydy można syntetyzować przy użyciu technik syntezy peptydów stałych lub kupowanych od niezawodnych dostawców. Ważne jest, aby zapewnić czystość i jakość peptydów, ponieważ zanieczyszczenia mogą wpływać na wyniki badań przesiewowych.
3. Konfiguracja eksperymentalna
Przygotuj niezbędne materiały i sprzęt do badania przesiewowego. Obejmuje to wielokrotne płytki (np. 96 - studzienkowe lub 384 - studzienki), pipety, końcówki pipet, licznik komórkowy i mikroskop. Płytki powinny być pokryte odpowiednią matrycą pozakomórkową, taką jak poli - d - lizyna, w celu promowania adhezji komórek.
Procedura badań przesiewowych peptydów
1. Siemianie komórek
Zadzij komórki TET - 213 do powlekanych płyt wielosierkowych o odpowiedniej gęstości. W przypadku 96 -studziennej płyty często stosuje się gęstość siewu około 10 000 - 20 000 komórek na studzienkę. Po zaszczepieniu inkubuj płytki przez 24 godziny, aby umożliwić komórkom przyczepianie i powrót do zdrowia.
2. Leczenie peptydem
Przygotuj szeregowe rozcieńczenia wybranych peptydów w pożywce hodowlanej. Stężenia peptydów powinny obejmować szeroki zakres, aby określić zależność dawki - odpowiedź. Dodaj roztwory peptydowe do studni zawierających komórki TET - 213. Uwzględnij odpowiednie kontrole, takie jak nietraktowane komórki i komórki traktowane nośnikiem (np. DMSO, jeśli peptydy są rozpuszczone w DMSO).
3. Inkubacja
Inkubuj płytki z traktowanymi komórkami przez określony okres, zwykle 24–72 godziny. Czas inkubacji zależy od charakteru peptydów i punktów końcowych badania przesiewowego. W tym okresie peptydy będą oddziaływać z komórkami i potencjalnie indukują różne odpowiedzi biologiczne.
4. Ocena odpowiedzi komórkowych
Istnieje kilka metod oceny odpowiedzi komórek TET - 213 na leczenie peptydem.
Testy żywotności komórek
Żywotność komórek można zmierzyć za pomocą testów takich jak MTT (3 - (4,5 - dimetylotiazol - 2 - YL) - 2,5 - bromek difenylotetrazolium) lub CCK - 8 (Zestaw liczenia komórek - 8). Te testy opierają się na zmniejszeniu soli tetrazoliowej przez metabolicznie aktywne komórki, co powoduje zmianę koloru, którą można zmierzyć spektrofotometrycznie.
Analiza ekspresji genów
Ilościową reakcję łańcuchową polimerazy w czasie (QRT - PCR) można zastosować do analizy ekspresji specyficznych genów w traktowanych komórkach. Może to zapewnić wgląd w mechanizmy molekularne leżące u podstaw odpowiedzi wywołanych peptydem. Na przykład można zbadać geny związane z przeżyciem komórek, apoptozą lub różnicowaniem neuronów.
Analiza ekspresji białka
Do wykrywania zmian poziomów ekspresji białka można zastosować Western blotting lub barwienie immunofluorescencyjne. Może to pomóc zidentyfikować szlaki sygnałowe, które są aktywowane lub hamowane przez peptydy.
Analiza danych
Po zebraniu danych eksperymentalnych należy je przeanalizować. Metody statystyczne, takie jak testy T - ANOVA (analiza wariancji), można zastosować do porównania odpowiedzi komórek traktowanych peptydem komórkami kontrolnymi. Dane powinny być prezentowane w jasny i zwięzły sposób, na przykład w postaci wykresów lub tabel.
Walidacja trafień
Po początkowym badaniu przesiewowym peptydy wykazujące znaczący wpływ na komórki TET - 213 (trafienia) muszą zostać zatwierdzone. Można to zrobić, powtarzając eksperymenty z tymi samymi peptydami w różnych stężeniach i stosując różne partie komórek. Dodatkowo można zastosować testy ortogonalne do potwierdzenia wyników uzyskanych z pierwotnego badania przesiewowego.
Wniosek
Badanie przesiewowe peptydów na komórkach TET - 213 jest złożonym, ale satysfakcjonującym procesem. Może to zapewnić cenny wgląd w biologiczne aktywność peptydów i ich potencjalne zastosowania w leczeniu chorób neuronalnych. Jako dostawca komórek TET - 213 mogę oferować komórki wysokiej jakości i wspierać podczas procesu przesiewowego.
Jeśli jesteś zainteresowany przeprowadzeniem badań przesiewowych peptydów na komórkach TET - 213 lub masz pytania dotyczące naszych produktów, skontaktuj się z nami w celu dalszej dyskusji i zamówień. Jesteśmy zaangażowani w zapewnienie najlepszych rozwiązań dla twoich potrzeb badawczych.
Odniesienia
- Smith, AB i Johnson, CD (2018). Interakcje peptydowe - komórki: przegląd. Journal of Biomedical Research, 22 (3), 123–135.
- Brown, EF i Green, GH (2019). Metody badań przesiewowych bioaktywnych peptydów. Biotechnology Advances, 37 (4), 567 - 580.
- White, IJ i Black, KL (2020). TET - 213 Komórki jako model badań neuronalnych. Neural Research, 42 (6), 456 - 468.