Aktywne składniki farmaceutyczne (API) zyskały znaczną uwagę w przemyśle farmaceutycznym ze względu na ich wysoką swoistość, niską toksyczność i potencjał leczenia szerokiego zakresu chorób. Jako wiodący dostawca API peptydów, jesteśmy zaangażowani w dostarczanie produktów peptydowych o wysokiej jakości za pomocą zaawansowanych metod syntezy. Na tym blogu zagłębimy się w różne sposoby syntetyzowania interfejsów API peptydów.
Synteza peptydu stałego - faza (SPP)
Synteza peptydu stałego - faza jest jedną z najczęściej stosowanych metod syntezy peptydowych API. Podejście to był pionierem Roberta Bruce'a Merrifielda w 1963 r., Który zrewolucjonizował syntezę peptydów i przyniosła mu nagrodę Nobla w dziedzinie chemii w 1984 r.
Podstawowa zasada SPP obejmuje przywiązanie C -końcowego pierwszego aminokwasu do nierozpuszczalnego stałego wsparcia, takiego jak żywica. Ta żywica zapewnia stabilną platformę do późniejszych reakcji chemicznych. Grupa aminowa przyczepionego aminokwasu jest chroniona odpowiednią grupą ochronną, zazwyczaj FMOC (9 - fluorenylometylooksykarbonyl) lub BOC (tert - butyloksykarbonyl).
Po dołączeniu pierwszego aminokwasu do żywicy grupa ochronna w jej grupie aminowej zostaje usunięta, odsłaniając reaktywną grupę aminową. Następny aminokwas, również z chronioną grupą aminową, jest następnie sprzężony z wolną grupą aminową wcześniej przyłączonego aminokwasu przy użyciu odczynnika sprzęgającego. Powszechnie stosowane odczynniki sprzęgające obejmują DIC (N, N ' - diiisopropylokarbodiimid), HBTU (O - Benzotriazol - N, N, N', N ' - tetrametylo - urronium - hexafluoro - fosforan), i HATU (O - (7 - azabenzotriozol - 1 - yl) - n, n, n', n ' - n' - n ' - n' - n ' - n. Tetrametylouronium hexafluorofosforan).
Po każdym etapie sprzęgania niereaktowane grupy aminowe są ograniczone, aby zapobiec tworzeniu sekwencji delecji. Zwykle odbywa się to przy użyciu bezwodnika octowego. Cykl odblokowania, sprzężenia i ograniczenia jest powtarzany dla każdego aminokwasu w pożądanej sekwencji peptydowej.
Po złożeniu całej sekwencji peptydowej na żywicy peptyd jest odszczepiany z żywicy za pomocą koktajlu cięcia. Ten koktajl usuwa również dowolne grupy chroniące boki - chroniące łańcuch, które były obecne na aminokwasach podczas syntezy. Rozszczepiony peptyd jest następnie oczyszczany metodami takimi jak chromatografia cieczowa o wysokiej wydajności (HPLC).
Roztwór - synteza peptydu fazowego
Rozwiązanie - synteza peptydu fazowego jest starszą metodą, ale nadal ma swoje zalety w niektórych sytuacjach. W tej metodzie wszystkie reakcje mają miejsce w roztworze, a peptyd nie jest przywiązany do solidnego podparcia.
Synteza rozpoczyna się od ochrony grup aminowych i karboksylowych poszczególnych aminokwasów. Podobnie jak SPP, grupy, takie jak FMOC lub BOC, są używane do grupy aminowej, a grupy estrów stosuje się do ochrony grupy karboksylowej.
Pierwszym krokiem jest sprzężenie dwóch chronionych aminokwasów z utworzeniem dipeptydu. Osiąga się to za pomocą odczynnika sprzęgającego, podobnego do tych stosowanych w SPP. Po utworzeniu dipeptydu grupy chroniące na jednym końcu dipeptydu są usuwane, a następnie jest on sprzężony z innym chronionym aminokwasem lub dipeptydem z powodu dłuższego peptydu.
Proces jest powtarzany krok - krok, aż do uzyskania pożądanej sekwencji peptydowej. Jednym z wyzwań dotyczących syntezy roztworu - faza jest oczyszczanie peptydów pośrednich na każdym etapie, ponieważ mieszanina reakcyjna zawiera różne - produkty i niereagowane materiały początkowe. Oczyszczanie jest zwykle wykonywane przez ekstrakcję, krystalizację lub chromatografię.
Podwiązanie chemiczne
Podwiązanie chemiczne jest potężną metodą syntezy dużych peptydów lub białek, które są trudne do montażu przy użyciu tradycyjnej syntezy SPP lub roztworu. Jedną z najbardziej znanych metod podwiązania chemicznego jest natywna podwiązanie chemiczne (NCL).
W NCL peptyd z C -końcowym tioester reaguje z innym peptydem z n -końcową resztą cysteinową. Reakcja występuje w łagodnych warunkach wodnych i powoduje tworzenie natywnego wiązania peptydowego między dwoma peptydami.
Proces ten obejmuje najpierw syntetyzację dwóch lub więcej segmentów peptydów za pomocą SPP lub syntezy fazowej. Jeden segment jest przygotowywany z tioestrem C -terminal, a drugi z n -końcową cysteiną. Segmenty te są następnie mieszane w odpowiednim buforze, a reakcja podwiązania ma miejsce. Po podwiązaniu, jeśli to konieczne, resztę cysteiny można dalej modyfikować lub wykorzystać jako uchwyt do dodatkowych reakcji chemicznych.
Zbieżna synteza
Synteza zbieżna to strategia, która łączy zalety zarówno SPP, jak i podwiązania chemicznego. Zamiast syntetyzowania całej sekwencji peptydowej w sposób liniowy, peptyd jest podzielony na mniejsze segmenty, które są syntetyzowane osobno za pomocą SPP.
Segmenty te są następnie podwiązane za pomocą metod podwiązania chemicznego. Takie podejście zmniejsza liczbę etapów sprzężenia wymaganych do syntezy dużych peptydów, które mogą poprawić ogólną wydajność i czystość produktu końcowego. Na przykład długi peptyd można podzielić na trzy lub cztery segmenty, z których każdy zawiera 10–20 aminokwasów. Segmenty te są syntetyzowane na żywicy, rozszczepione, a następnie podwiązane w sposób zbieżny.
Przykłady naszych peptydowych interfejsów API
Oferujemy szeroką gamę peptydowych interfejsów API, w tymC20 - OTB - Glu (obbu) - atbi10 - atbu) Zdjęcia - O OIE - OANA - OEWC20 (OTBU) - Glu (OTBU), IPalmitoyl - Glu (OSU) - OTBU. Te peptydy są syntetyzowane przy użyciu zaawansowanych metod opisanych powyżej, zapewniając wysoką czystość i jakość.
Kontrola jakości w syntezie API peptydów
Kontrola jakości ma ogromne znaczenie w syntezie peptydowych API. Mamy kompleksowy system kontroli jakości, aby zapewnić, że nasze produkty spełniają najwyższe standardy.
Po syntezy peptyd analizuje się różnymi technikami, w tym HPLC, spektrometrią mas (MS) i jądrowego rezonansu magnetycznego (NMR). HPLC stosuje się do określenia czystości peptydu, podczas gdy MS stosuje się do potwierdzenia masy cząsteczkowej peptydu. NMR może dostarczyć informacji o strukturze i konformacji peptydu.
Przeprowadzamy również badania stabilności, aby zapewnić, że interfejsy peptydowe pozostają stabilne w różnych warunkach przechowywania. Obejmuje to testowanie peptydu w różnych temperaturach, wartościach pH i w obecności różnych substancji pomocniczych.
Wniosek
Synteza peptydowych interfejsów API jest złożonym i wielokrotnym procesem, który wymaga zaawansowanych technik i ścisłej kontroli jakości. Jako dostawca API peptydów stale badamy nowe metody i technologie w celu poprawy wydajności i jakości naszej syntezy. Niezależnie od tego, czy dzieje się to poprzez syntezę peptydów stałych, syntezy roztworu - fazę, podwiązanie chemiczne lub synteza zbieżna, jesteśmy zaangażowani w zapewnianie naszym klientom wysokiej jakości produktów peptydowych.
Jeśli jesteś zainteresowany zakupem naszych peptydowych interfejsów API lub masz pytania dotyczące syntezy peptydów, skontaktuj się z nami w celu omówienia zamówień. Z niecierpliwością czekamy na współpracę z Tobą, aby zaspokoić Twoje potrzeby API peptydów.
Odniesienia
- Fields, GB i Noble, RL (1990). Synteza peptydu stałego - faza przy użyciu 9 - aminokwasów fluorenylometoksykarbonylowych. International Journal of Peptyd and Protein Research, 35 (2), 161 - 214.
- Dawson, PE, Muir, TW, Clark - Lewis, I., i Kent, SBH (1994). Synteza białek przez natywną podwiązanie chemiczne. Science, 266 (5186), 776 - 779.
- Chan, WC i White, PD (2000). Synteza peptydu fazy stałej FMOC: praktyczne podejście. Oxford University Press.